中国医科大学第一临床学院呼吸疾病研究所(110001) 苏新明 康 健
日本医科大学老人病研究所 川並汪一
血小板源生长因子PDGF-B 和它的受体, PDGFR-β,通过募集PDGFR-β阳性的间叶细胞祖细胞在稳定新生血管过程中起着重要的作用。缺乏PDGF-B 会导致壁细胞募集不充分,从而影响内皮细胞生长,渗透性,脆性改变,血管扩张,出血,灌注损伤以及缺氧。 为了明确血小板源生长因子PDGF-B和它的受体,PDGFR-β,在支气管哮喘小鼠模型气管及肺组织中的表达情况,我们进行了本试验以进一步明确支气管哮喘时血管相关因子的变化及其作用。雄性A /J 小鼠 30 只,分成三组,应用卵清蛋白制备小鼠模型。A 组:正常对照组;B 组:急性早期支气管哮喘组;C 组:慢性延长期支气管哮喘组。在戊巴比妥钠麻醉状态下,开腹,打开胸腔,分离气管及肺组织,放入除RNA 酶自由水处理过的管中直接液氮冷冻,-80℃冷存。应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测气管和肺组织血小板源生长因子B 及其受体(PDGFB/PDGFRβ)mRNA 表达情况,应用Westernblot 方法检测PDGFB/PDGFRβ蛋白表达水平。
结果显示:(1)应用RT-PCR 技术及琼脂糖凝胶电泳, PDGF-B mRNA 在正常气管未检测到,而在慢性延长期哮喘小鼠气管组织PDGF-B mRNA 显示出清晰的条带。周围肺组织在正常小鼠也表达PDGF-B mRNA,哮喘小鼠肺组织表达增强,在慢性延长期表达明显增加。PDGFRβ mRNA 的表达与PDGFB 相似,在正常气管未检测到,而在支气管哮喘小鼠肺组织检测到其表达,气管组织在慢性延长期显示出明显的条带。周围肺组织在正常小鼠表达PDGFRβ,哮喘小鼠肺组织与正常组织比较,在急性早期变化不明显,而在慢性延长期表达明显增加。(2)应用Western blot 蛋白检测技术,在慢性延长期哮喘小鼠气管组织PDGF-B 显示出清晰蛋白表达的条带。与基因检测结果相一致。周围肺组织在正常小鼠也表达PDGF-B 蛋白,检测结果显示清晰的条带,在慢性延长期表达明显增加。在慢性延长期哮喘小鼠气管组织PDGFRβ显示出清晰蛋白表达的条带。周围肺组织在正常小鼠也表达PDGFRβ蛋白,哮喘小鼠肺组织与正常组织比较,在慢性延长期表达明显增加。与基因检测结果相一致。
结果表明:PDGFB和PDGFRβ基因与蛋白表达水平在支气管哮喘气管及肺组织均增加,特别在慢性延长期,PDGFB和PDGFRβ系统在支气管哮喘气道血管再生和重塑过程中起着重要的作用。