哮喘专题:小鼠气道反应性的检测方法及质量控制

2007-09-07 00:00 来源:丁香园 作者:丁香园通讯员
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广州医学院第一附属-医院广州呼吸疾病研究所(510120)
张清玲 谢佳星 赖克方 钟南山

    气道反应性测定在支气管哮喘(简称哮喘)的诊断、治疗和疗效的评估非常重要。鼠类价格低廉,拥有数以千万计的近亲繁殖种属,有最密集的已知基因标志,是哮喘研究的标模型。我们的研究目的在于探讨小鼠气道反应性的检测方法及质量控制。目前比较成熟的实验动物肺功能检查方法有体内侵入性肺功能检查法体内非侵入性肺功能检查法。

    运用美国的Buxco 公司生产的Buxco“RC”系统及Buxco “penh”系统比较OVA 组(于实验流程第0、7、14 天给予腹腔注射致敏10μg 的OVA+1mg的Al(OH)3 生理盐水混悬液200μl;实验流程第28 天给予滴鼻50μl 激发,n=15)及对照生理盐水组(于实验流程第0,7,14 天给予腹腔注射200μl 生理盐水,实验流程第28 天给予50μl 生理盐水滴鼻,方法同前,n=14)的气道反应性的检测结果。

    发现使用整体体积描记系统检测两组小鼠的气道反应性,Mch 浓度为6.25、12.5、25 mg/ml 时,OVA 组(n=8)Penh 上升的百分比较 生理盐水组(n=8)明显升高;OVA 组PC100 Penh、PC200 Penh 显著小于生理盐水组(P<0.01)。而在气管插管(呼吸机辅助通气)、食道内压测压侵入性肺功能检查法中两组小鼠的气道反应性(RL)的变化差异无统计学意义。另外,OVA 组BALF 中嗜酸粒细胞百分比计数和细胞总数较对照组明显增加,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。OVA 组支气管及血管周围炎性细胞浸润,并可见嗜酸粒细胞。生理盐水组支气管上皮为单层柱状,无黏膜皱襞无水肿及炎性渗出。

    提示在侵入性肺功能检查法采取放置食道测压管检测胸腔内压,可以获得经肺压,从而获得肺阻力和肺动态顺应性等金标准参数;在使用整体体积描记系统检测气道反应性时,研究者必须要考虑到此法中吸入暴露包括了鼻和胃肠摄入,结果阳性并不代表动物气道反应性升高,因为上呼吸道(包括鼻、咽、喉等)阻力的改变也会影响实验的结果;侵入性检查法的优点是在检查或激发时对动物无压力,可获得肺阻力和肺动态顺应性等金标准参数,且吸气暴露聚焦于肺,因为鼻暴露被排除了,因此如果研究者需要获得敏感、准确的肺功能参数;或实验需要控制性的经下呼吸道肺投入给药,并排除其他吸入途径(如鼻、胃、皮肤)等;又或如在哮喘的某项研究中需要药物在肺中有高沉淀剂量时,那么选择侵入性检查法比较好;WBP 系统检测设置简单并可以同时检查一组动物,没有了身体束缚,动物呼吸更自然,可以同次同条件检测多只实验动物,但此法应该定位在实验者需要大批量的进行相关实验动物的筛查,或确定鼻暴露或胃肠吸入不是实验的干扰因素时(在哮喘动物模型尤其应注意到这个因素);本研究的OVA 组动物虽然存在血管、气管周围炎,Penh 上升较对照组明显增高,但由于不能排除上气道的影响,不能确定为哮喘模型。

编辑: 张靖

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